Hasil Teknik Western Blot Tidak Ada Sinyal? Berikut Tips Optimasi dari Agrisera, Produsen Antibodi Asal Swedia
Western blot, salah satu teknik laboratorium yang paling umum digunakan saat riset dengan objek protein. Namun, cukup kompleks dan banyak faktor yang dapat mempengaruhi hasilnya.
Apabila Anda mengalami masalah dalam deteksi protein target, berikut optimasi yang dapat Anda implementasikan:
- Gunakan fraksi/organ seluler di mana protein yang ingin diekspresikan. Banyak antibodi terhadap protein berekspresi rendah tidak akan mendeteksi sinyal dalam ekstrak sel total.
- Pastikan bahwa kondisi transfer protein yang lebih baik, terutama dalam kasus protein dengan berat molekul rendah , ada risiko, bahwa protein hancur melalui membran selama transfer protein, yang mengakibatkan tidak ada pita pada noda.
- Tingkatkan beban protein menjadi 20-50 ug/sumur
- Pemblokiran: 5-10% susu tanpa lemak 1 jam/RT atau ON/4°C
- Antibodi primer yang dimurnikan dengan afinitas dapat menghasilkan sinyal yang tidak diperoleh dalam kasus serum atau fraksi IgG total.
- Pengenceran awal antibodi primer yang direkomendasikan : inkubasi 1: 500-1:1000/ON/4°C
- Jika target berekspresi rendah, metode deteksi paling sensitif harus diterapkan: Chemiluminescence (ECL) atau fluoresensi lebih disukai daripada deteksi chromogenic (ALP) -antibodi sekunder terkonjugasi).
- Overexpose , untuk memastikan bahwa pita yang diinginkan tidak memerlukan waktu lebih lama untuk divisualisasikan, dan sesuaikan protokol Anda.
Baca Juga: Peran HPV DNA Pada Skrining Kanker Serviks
Optimalisasi Western blot – sebelum dan sesudah
- Kiri: sebelum optimasi kondisi western blot
- Kanan: setelah optimasi kondisi western blot
Untuk katalog antibodi dari Agrisera, kami menyarankan untuk memeriksa lembar informasi produk untuk kondisi eksperimental yang sedang Anda uji, termasuk jenis sampel, muatan protein, dan banyak lagi.
PT Biosains Medika Indonesia dapat memfasilitasi diskusi lebih lanjut mengenai Teknik Western Blot. Anda dapat melakukan diskusi dan penelitian lebih lanjut bersama kami dengan menghubungi kontak: Dr. Ruth M Winne/Biosm Indonesia (+62 817 9154 607/info@biosm-indonesia.com/marketing@biosm-indonesia). Teknis Biosm akan dengan senang hati membantu dan mendukung riset Anda.
